關于培養皿細菌培養的條件

我們在用培養皿設備細菌培養的時候，首先由于細菌無處不在，因此從制備培養基時開始，整個培養過程必須按無菌操作要求進行，否則外界細菌污染標本，會導致錯誤結果；而培養的致病菌一旦污染環境，就會引起交叉感染。?因此培養皿要經過高溫滅菌，并且每一組的培養皿要在相同的環境條件下培養。經過高溫處理后可以將培養皿上、培養基內混有的細菌或真菌的孢子等殺死（經過嚴格的高溫滅菌的環境中是不可能有細菌和真菌存在的），這樣就排除了實驗外其他環境的污染。?用培養皿設備培養時應根據細菌種類和目的等選擇培養方法、培養基，制定培養條件（溫度、pH值、時間，對氧的需求與否等）。一般操作步驟為先將標本接種于固體培養基上，做分離培養。再進一步對所得單個菌落進行形態、生化及血清學反應鑒定。培養基常用牛肉湯、蛋白胨、氯化鈉、葡萄糖、血液等和某些細菌所需的特殊物質配制成液體、半固體、固體等。一般細菌可在有氧條件下，37℃中放18～24小時生長。厭氧菌則需在無氧環境中放2～3天后生長。個別細菌如結核菌要培養1個月之久。

你的細菌培養物還在增長嗎?引物在OD-600進行測量

細菌生長曲線綜述，讓我們先回顧一下細菌生長曲線的4個基本階段:log階段，滯后階段，靜止階段和死亡階段(圖1)。在此期間，細胞正在適應和調整他們的新環境。然后，培養進入對數期，在此期間，細胞迅速分裂，數量翻倍(大腸桿菌在對數期每20分鐘翻一番)。當你在液體培養液中達到最大的細胞密度時，細胞就進入了靜止期。在這一階段，細胞數量沒有整體增加——死亡的細胞被新分裂的細胞所取代，但活細胞的總數保持不變。如果你在研究孢子形成細菌，這可能是營養細胞孢子形成的階段，或形成新的孢子。最后，死亡(或下降)階段是由多種因素引起的，包括營養或氧氣的缺乏，細胞代謝引起的介質pH值的變化，或有毒細胞廢物的積累。?使用OD600確定您的文化處于什么階段?最簡單的方法是測量OD600，或600納米的光密度，來測量一個培養基在其生長曲線上的距離。這種波長是專門為細菌OD測量而選擇的，因為與紫外線波長不同，600nm對培養物無害。這種波長通常也不會被像TSB和LB這樣的黃色介質吸收。通過監視OD600的增長速度，您可以確定培養物的滯后、記錄和固定相。?那么如何測量呢?對于一個簡單的懸浮在液體中的細胞，你首先需要零或“空白”的分光光度計與新鮮的，未接種的媒介減去媒介對測量的任何吸收貢獻。然后，取您的文化樣本并測量OD600。這種測量方法可以很容易地計算出培養瓶中每毫升培養細胞的總數。還不錯吧?盡管如此，還是有一些事情需要注意:?當你提取一個培養基樣本時，確保你混合的很好，并立即進行測量，因為細胞可以在一分鐘左右的時間內開始沉淀，這將導致不準確的結果。?如果細菌在溶液中形成生物膜或聚集物，這將嚴重影響測量的準確性和精度。在這種情況下，您可能需要對培養物進行聲波降解或進一步處理，以分解這些“簇”。查閱有關您正在使用的菌株的文獻，以避免或消除這個問題。?最重要的是，>1的OD值不準確!這樣高的OD讀數超出了大多數分光光度計的動態范圍，這意味著這些讀數不會隨著細胞濃度的增加而線性增加。如果你得到的OD值大于1，稀釋你的樣品2倍或更多直到它達到OD600<1。?如果你經常用燒瓶培養細菌，訓練自己用眼睛估計OD值是有幫助的。這樣，當燒瓶明顯不在您正在尋找的OD范圍內時，跳過OD600檢查可以節省寶貴的時間。查看本文了解更多信息，并考慮使用微板閱讀器來提高OD測量的吞吐量。?其他監測生長和代謝的方法?雖然使用一種培養物的OD600來監測生長是一種久經考驗的真實方法，但是還有其他幾種方法來評估細菌培養物的生長和代謝。您可能會發現其中一些因素對于您的特定應用程序也更相關或有用!?通過采集培養物的樣本并在顯微鏡下進行檢查，你可以開始對培養物中活細胞的近似濃度有一個了解。額外的好處:你可以比較細胞的圖片，看看是否有不同的形態學批次，或多少營養細胞在一個孢子形成培養。?溶解氧和二氧化碳?？紤]啤酒(由酵母制成)，康普茶(由酵母和各種細菌制成)，以及其他由微生物發酵的飲料。在這些例子中，隨著發酵的進行，氧氣(O2)被消耗，二氧化碳(CO2)被形成。同樣的過程發生在有氧培養的細菌培養中!溶解O2和CO2探頭是生物反應器中常用的探頭。如果你想要一個微創的選擇,光學傳感器(和補丁)存在,使用LED熒光監控溶解-2從外面瓶啊!?大多數細菌隨著時間的推移會降低培養基的pH值，包括大腸桿菌。對于某些物種來說，酸的產生實際上會限制一個文化的最大生長和生存能力。與氧傳感器一樣，有方法可以對燒瓶中的pH值進行無創連續監測。?糖的分析。有了某些儀器，從生長培養基中快速可靠地測定殘余糖分是可能的。例如，如果你的培養基中主要的碳源是葡萄糖，在細菌生長的中途獲取葡萄糖測量數據可以讓你了解培養基在生長曲線中的位置。?那么你應該在什么時候收獲一種文化呢??簡而言之，這完全取決于文化的最終目標是什么。例如，我曾經大量培育和誘導大腸桿菌過度表達非本地蛋白，然后從培養中純化。我經常發現，我從培養物中獲得的蛋白質的質量和數量取決于我收獲時的相細胞。然而，在其他情況下，目標只是盡可能多的獲取細胞。?一旦你知道了需要采集細胞的特定生長階段，一定要進行一些測試(包括測量)，以確保你對細菌生長時間的評估是正確的。這將給你一個強烈的感覺，你的文化需要多長時間準備收獲，并提供歷史數據比較增長曲線。始終從一個較小的“種子”文化開始，以獲得可靠的和持續增長的燒瓶。最后，如果你不太適應減少污染的風險，可以測試你的細胞培養技術幾次。